저번 포스팅에서는 일반적인 snp/genotype calling 메소드에 대해서 알아보았다. 이번에는 cancer분석에서의 somatic mutation 분석에 대해서 살펴보도록 하자. 이번 포스팅에서는 "Virmid: accurate detection of somatic mutations with sample impurity inference"라는 논문을 사용?할 것이다. 일반적으로 암 분석을 한다는 것 즉 somatic mutation을 찾는것은 variant calling의 하나로 NGS가 clinical로 가기 위한 기본적인 단계라고도 할 수 있다. somatic mutation을 찾는 전통적인 방법은 샘플 (normal/disease 또는 normal/cancer 또는 control/mixed ..
바로전에 포스팅한 variant calling에 대한 것에 후속으로 somatic mutation에 대한 내용을 정리하고 있다. 살짝 귀뜸해주면 VarScan이라는 툴에 대한 논문을 보려다가 "Virmid: accurate detection of somatic mutations with sample impurity inference"라는 논문으로 급선회했고 virmid는 간단히 cancer 분석에서 contol sample이 mixed된 disease sample에 대해서 control sample이 어느정도의 proportion을 차지하는지를 estimate하여 이것을 somatuc mutation을 calling하는데 사용하는 논문이다. 뭐 그거 그렇고, 바로 snp/genotype/somtic mu..
지금까지 수천 샘플에 대한 genotype/snp calling을 수행했음에도 2011년도에 발표된 "Genotype and SNP calling from next-generation sequencing data"라는 리뷰 논문을 이제서야 꺼내어 읽어본다. 이 논문에 대한 내용은 이미 "ideas should be in papers" 블로그에 소개되었으나 나름 다시 정리하는 차원에서 여기저기 살을 붙여서 작성했다. 간혹 이해가 가지 않는 부분은 참고하여 작성했다. 전체적인 genotype/snp calling 분석 Base calling genotype/SNP calling에 있어서 가장 기초가 되는 것은 per-base quality score로 이는 일반적으로 NGS 장비의 기본 base callin..
좀 더 많은 genomes이 필요한 시대 $1000 게놈 시대가 진짜 도래했다. 이제까지 NGS 연구의 대부분이 하나의 genome 데이터를 가지고 연구(rare variant를 찾던)하던 것이 GWAS처럼 대규모의 cohort의 샘플을 수용하기 시작하면서 "Common Variant Association Study (CVAS)"에 눈을 돌리기 시작했다. 이는 가격뿐만 아니라 대량의 NGS 데이터를 다루기 위한 툴 또한 발전하면서 가능케 되었다. 이러한 CVAS 데이터는 cohort의 샘플들(individucal callsets)을 개별적으로 variant call을 하는 것이 아니라, joint callset을 만들어 joint variant discovery를 수행하여 흔히 말하는 power를 부여할..
Clinical Sequencing을 위한 준비 - 표준 variants 미국 NIST (National Institute of Strandards and Technology)의 Div. Biosystems and Biomaterials 에서는 추후 임상으로서의 NGS 데이터 적용을 대비하기 위한 작업을 하고 있다. 이와 유사하게 국내에는 한국표준과학연구원 국가참조표준센터 (NCSRD)이 생명과학 관련 참조 표준 제정하고 있는데요. 아직 NGS 데이터와 관련한 표준은 없는 상태이다. (하단의 생명과학 관련 참조 표준 목록 참고) NIST는 NA12878에 대해서 자세한, 표준의 variants call set을 만들어 calling 알고리즘의 벤치마크나 기타 여러 분야에 활용할 수 있도록 하고 있다. 이..
FASTQ 파일을 받았다면 다음과 같은 기본 정보는 필수적으로 확보하시기 바랍니다. 흔히 NGS 시퀀싱은 기본적으로 1개의 sample로 부터 1개의 DNA library가 만들어지고 시퀀싱 장비의 1개의 lane/slide에 넣어져 시퀀싱이 됩니다. 한개의 sample은(@RG:SM) DNA library prepare 단계를 거쳐 시퀀싱 장비에 삽입?되게 되는데요. 하나의 샘플은 1개 이상의 library로 제작될 수 있습니다. 이렇게 되면 동일 샘플이지만 라이브러리 제작이 서로 다르게 되어 이를 구분해 주어야합니다. 이는 추후 분석시 alignment된 BAM 파일에 @RG:LB로 구분되어 사용됩니다. 자 이렇게 만들어진 library는 실제 시퀀싱 장비에 넣어지는데요. 이때 동일한 장비에 서로 다..